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如何對液相色譜儀的分離條件進行優化?

內容簡介:液相色譜儀由高壓輸液泵、進樣系統、溫度控制系統、色譜柱、檢測器、信號記錄系統等部分組成。應用于生物化學、生物醫學、環境化學、石油化工等部門。如何對液相色譜儀的分離條件進行優化?
      液相色譜儀利用混合物在液-固或不互溶的兩種液體之間分配比的差異,對混合物進行先分離,而后分析鑒定的儀器。根據固定相是液體或是固體,又分為液-液色譜(LLC)及液-固色譜(LSC)。對高沸點、難氣化合物的混合物通過色譜柱和淋洗劑并以實現分離。系統由儲液器、泵、進樣器、色譜柱、檢測器、記錄儀等幾部分組成。儲液器中的流動相被高壓泵打入系統,樣品溶液經進樣器進入流動相,被流動相載入色譜柱(固定相)內,由于樣品溶液中的各組分在兩相中具有不同的分配系數,在兩相中作相對運動時,經過反復多次的吸附-解吸的分配過程,各組分在移動速度上產生較大的差別,被分離成單個組分依次從柱內流出,通過檢測器時,樣品濃度被轉換成電信號傳送到記錄儀,數據以圖譜形式打印出來。在該儀器的使用中,應對其分離條件進行優化。

如何對液相色譜儀的分離條件進行優化?
      1、減少色譜柱柱內展寬,提高柱效
? (1)流速:從H-U曲線可知,HPLC的最佳流速在流速很小處,減少流速有利于提高柱效,但在實踐中為加快分析速度,常采用比最佳流速高數倍的流速。
      (2)流動相:選用低粘度的流動相,有利于增大液相色譜儀分析樣品組分在溶劑中的擴散系數Dm,減少傳質阻力。
? (3)色譜柱柱溫:適當提高液相色譜儀柱溫,可降低流動相粘度,減少傳質阻力,但柱溫升高將使分辨率降低,柱壽命短,易產生氣泡,一般在室溫下進行。
      (4)固定相:
       ①粒度小,均勻,以減小渦流擴散和流動相傳質阻力;
       ②改進結構,盡可能采用大孔徑和淺孔道的表面多孔型載體或全多孔微粒型載體,減少滯留流動相傳質阻力。
? 2、色譜柱柱外展寬
?? 色譜柱柱外譜帶展寬又稱“柱外效應”,系指從液相色譜儀進樣點到檢測池之間除柱子本身以外的所有死體積所引起的色譜峰展寬,色譜柱柱效下降。可分為:
? (1)色譜柱柱前展寬  主要由進樣引起,減小進樣器的死體積,用閥門進樣可減少柱前譜帶展寬,提高柱效。
      (2)色譜柱柱后展寬  主要由接管、檢測器流通池體積及檢測器響應時間等因素所引起。因此,盡可能用短而內徑細的接管,減少流通池體積,改進液相色譜儀檢測器和記錄系統的響應速度等都是克服柱后展寬的途徑。
分析結束后反復沖洗進樣口,防止樣品的交叉污染或堵塞。

      注:液相色譜儀由高壓輸液泵、進樣系統、溫度控制系統、色譜柱、檢測器、信號記錄系統等部分組成。應用于生物化學、生物醫學、環境化學、石油化工等部門。

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